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它是用高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑，緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后依次進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)由記錄儀、積分儀或色譜工作站記錄。
高效色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。
色譜柱使用一段時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時(shí)間改變等變化，如不采取措施，將會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。因此，有必要加強(qiáng)和規(guī)范色譜柱的管理，從而延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。
影響色譜柱使用壽命的因素
1 流動(dòng)相
在以水溶液為流動(dòng)相時(shí)，水溶液中的微生物例如細(xì)菌容易生長(zhǎng)，當(dāng)用水溶液或有機(jī)酸緩沖液保護(hù)柱子時(shí)，一些霉菌可能在色譜柱中滋生，堵塞固定相顆粒間的空隙。由于濕法填充技術(shù)的問(wèn)世，目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um，流動(dòng)相中的顆粒雜質(zhì)很容易先沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。流動(dòng)相的pH值對(duì)色譜柱也有影響，特別是對(duì)化學(xué)鍵合硅膠填料，水溶液的pH***適范圍在2~7.5之間，當(dāng)pH>8時(shí)，硅膠會(huì)釋出生成絮狀物堵塞柱子，且難以復(fù)原，柱效很快降低，甚至完全失效。
當(dāng)在緩沖液中加入有機(jī)溶劑例如甲醇或乙腈時(shí)，鹽類(lèi)的溶解度下降，會(huì)析出鹽沉淀，堵塞柱子。同時(shí)流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑和鹽會(huì)腐蝕色譜柱頭的篩板，產(chǎn)生柱頭凹陷。流動(dòng)相的極性對(duì)柱子也有一定影響，對(duì)于硅膠柱，甲醇、水、冰乙酸等極性較大物質(zhì)會(huì)破壞填料；反之，對(duì)于化學(xué)鍵合硅膠，極性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。堿性溶液會(huì)破壞陽(yáng)離子交換樹(shù)脂色譜柱，而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹(shù)脂柱。
2 樣品和固定相
如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動(dòng)相中，在通過(guò)固定相會(huì)堵塞柱子，樣品中的顆粒雜質(zhì)也會(huì)堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質(zhì)等通過(guò)柱子時(shí)會(huì)產(chǎn)生不可逆吸附，這樣固定相的活性點(diǎn)被覆蓋。樣品組分還會(huì)與固定相產(chǎn)生反應(yīng)，尤其是對(duì)于氨基柱的影響較為嚴(yán)重。因?yàn)榘被着c酐、酮形成希夫（Schiff）縮合而減少活性點(diǎn)，使保留時(shí)間縮短。色譜柱鍵合相基團(tuán)脫落、固定相分解和活性基團(tuán)變性以及會(huì)影響柱效和保留時(shí)間的顯著改變。大多數(shù)鍵合相都是通過(guò)硅氧硅鍵（Si-O-Si）連接在硅基質(zhì)上，形成帶有有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R（R為CnH2n+1），硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂，使鍵合基團(tuán)脫落。
